人工授精是养羊业中的重要实用生产技术，但是受胎率不高，限制了其在小型羊场及农村的应用。目前关于提高输精效果的研究有很多[1-4]，影响羊人工授精效果的因素主要有卫生状况、精液处理、输精技术等，本试验通过几组对比为实际生产筛选出一套有效的输精技术，以推动肉羊生产及品种改良进程。
1. 材料与方法
1.1试验材料
1.1.1 试验动物 所有试验动物均是来自本单位下属青岛奥特种羊场的良种羊，包括无角道赛特、德克塞尔和小尾寒羊，母羊1.5周岁以上，公羊1.5～2周岁，标准饲管。
1.1.2 仪器与试剂
1.1.2.1仪器设备
显微镜；恒温水浴锅；羊用金属输精器（配注射器用）；玻璃输精器；羊用细管输精枪；羊用开膣器；手电筒；试管；解冻杯
1.1.2.2试剂药品
葡萄糖；蔗糖；乳糖；柠檬酸；柠檬酸钠；青霉素；链霉素；95％酒精；生理盐水；新洁尔灭；高锰酸钾；VB12
1.2 试验方法
1.2.1 待配母羊的准备 配种前两个月根据母羊年龄、膘情、健康状况、配种史进行选择，要求2～5岁、膘情适中、健康（尤其没有生殖疾病）、无不良配种记录。选择后按试验要求随即分组，除正常标准饲管外每天加喂胡萝卜1斤/只，强制运动2h。
1.2.2 公羊及精液的准备 配种前2个月选择2～5岁、身体健康、膘情适中、性欲旺盛的公羊加强饲管及运动，增加日粮中蛋白及维生素的水平，每天强制运动2h。配种前一个月开始采精并检查精液质量，坚持每周采精2～3次。配种前更具采精记录选择精子密度高、活力高、射精量大、精液质量稳定、性欲强的公羊留作配种用。冻精输精时按常规方法解冻并检查精子活力，0.3以下的不用。
1.2.3 抗生素的添加对鲜精输精效果的影响
a.待配母羊的准备 试验羊挑选后分成2组，按1.2.1饲管。
b.发情母羊的识别 选择健康、性欲旺盛的青年公羊每天早上采用小群试情，结合对外阴及行为的观察做好记录。
c.输精 发情后立即输精，间隔8～10h再输精1次，次日试情仍发情的继续输精。Ⅰ组采用子宫颈内无抗生素鲜精输精，Ⅱ组采用子宫颈内添加抗生素鲜精输精，输入有效精子在5000～10000左右，整个输精过程在前低后高的配种架上进行，输精结束后停留10～15min再驱赶母羊。输精器械输精前要严格消毒，输精后要立即清洗，鲜精中含青链霉素各1000IU/ml。
d.妊娠判断 配种后母羊坚持每天试情，输精后连续两个发情周期不发情视为妊娠，统计受胎率。
1.2.4 输精位置及PGF2α对鲜精与冻精输精效果的影响
a.待配母羊的准备 选择后随即分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ六个组，按1.2.1饲管。
b.发情母羊的识别 选择健康、性欲旺盛的青年公羊每天早上采用小群试情，结合对外阴的观察做好记录。
c.输精 本试验采用同只公羊多次输精，发情后立即输精，间隔8～10h再输精1次，次日试情仍发情的继续输精。Ⅰ～Ⅳ组分别采用子宫颈鲜精、子宫颈冻精、子宫内鲜精、子宫内冻精输精，输入有效精子在5000～10000左右，精液中不添加PG; Ⅴ、Ⅵ组分别采用子宫颈鲜精、子宫颈冻精输精，精液中添加2％（v/v）的PGF2α注射液。整个输精过程在前低后高的配种架上进行，输精结束后停留10～15min再驱赶母羊。输精器械输精前要严格消毒，输精后要立即清洗，冻精与鲜精中都加有1000IU/ml的双抗。子宫内输精时左手用宫颈钳固定子宫颈，右手持输精枪试探着插入，进入盲囊后稍后退，然后尝试着从其他地方前进，直到感觉阻力突然消失时即进入子宫体，稍前行后输精。
d.妊娠判断 配种后母羊坚持每天试情，输精后连续两个发情周期不发情视为妊娠，统计受胎率。
2. 试验结果
试验中对添加抗生素对鲜精输精效果的影响进行了研究（见表1），用无抗生素的鲜精给106只母羊输精，73只受胎，受胎率为68.9％；用添加1000IU/ml双抗的鲜精输精215只，185只受胎，受胎率86％。
表1 稀释液中添加抗生素对鲜精输精受胎率的影响
输精母羊数 受胎母羊数 受胎率
Ⅰ组（无抗生素） 106 73 68.9%
Ⅱ组（1000IU/ml双抗） 215 185 86%
试验中比较了6个试验组的输精结果，输精母羊数、受胎母羊数及受胎率分别为：Ⅰ组203、175、86.2％，Ⅱ组96、41、42.7％，Ⅲ组87、83、95.4％，Ⅳ组109、62、56.9％，Ⅴ组102、89、87.3％，Ⅵ组117、57、48.7％，见表2。
表2 输精位置及PG添加对受胎率的影响
输精母羊数 受胎母羊数 受胎率
Ⅰ组（宫颈鲜精无PG） 203 175 86.2%
Ⅱ组（宫颈冻精无PG） 96 41 42.7%
Ⅲ组（宫内鲜精无PG） 87 83 95.4%
Ⅳ组（宫内冻精无PG） 109 62 56.9%
Ⅴ组（宫颈鲜精含PG） 102 89 87.3%
Ⅵ组（宫颈冻精含PG） 117 57 48.7%
3. 讨论
目前生产中使用较多的仍然是鲜精输精，但是由于现场条件及技术人员水平的制约，对卫生不太注意，精液中细菌含量很高，精液稀释时多采用现成的稀释液如：生理盐水、维生素B12等（不含抗生素），输精器械消毒处理也不严格，整个操作过程中会造成了精液的污染，降低受胎率的同时也造成了生殖道疾病的传播。试验表明精液内细菌数与精子存活时间及活力保持有着明显的负相关，因此在精液中添加一定量的抗生素非常必要，这不仅是提高受胎率的一项重要措施，也是减少疾病传播的基本要求。本试验中使用含双抗1000IU/ml的精液输精，与对照组有显著差异，分析试验结果认为，添加抗生素一方面延长了精子在保存液中的存活时间，另一方面输精后对雌性生殖道内的细菌也有一定的杀灭作用，这与生产中对患轻度子宫内膜炎的母牛先注入大量抗生素再输精以提高受胎率的做法有相似的道理。羊的轻度子宫炎症不容易被发现，加入抗生素输精就显得更为重要。
卵子从到达受精部位（具有受精能力）到丧失受精能力的时间为2小时，输精过早，精子在卵子没有到达受精部位之前已经死亡或不具备受精的能力；输精过迟，等精子到达受精部位时卵子已经死亡或不具备受精的能力,但是排卵时间很难进行准确判断，生产中采用多次输精来提高受胎率。但是对于冻精来说，由于冷冻过程对精子造成了一定的损伤，使其在雌性生殖道内的存活时间缩短，使其在恰当的时间到达受精位置非常重要，国内外的有些试验已经证明在直接子宫内输精能显著提高冻精受胎率，但是在生产中推广宫内输精是很困难的，只有部分经产母羊可以进行宫内输精，生产中只有通过其他方法来解决这一难题，目前添加激素的研究较多，本试验中通过几个试验组的比较发现PG确实能提高受胎率，但是对鲜精输精效果影响不大。Kelly 1985年报道认为PGE能显著提高精子运动速度，精子头部的转动速率和精子的穿透能力[5]，还有研究认为在解冻液里添加PG能提高精子解冻活力和顶体完整率。此外PGF2α还能促进子宫平滑肌的收缩，有利于精子的在生殖道内的运行；PGF2α有促排卵作用及促输卵管收缩作用，对排卵、卵子运行、受精及胚胎着床有积极的正面意义。PGF2α是生产中常用的药物，但是在羊的人工授精中使用不多，本试验表明无论是鲜精还是冻精添加PGF2α都能提高冻精受胎率，尤其是在冻精使用过程中值得推广，但是最佳的添加剂量值得进一步研究。本试验参照别人的方法对经产母羊进行过子宫颈输精发现部分经产母羊发情时可以过子宫颈或子宫颈内深部输精，而且结果显示子冻精宫内输精受胎率显著高于子宫颈输精，对于经产羊冻精输精可以采用这一技术以提高受胎率。
本试验中添加抗生素和PG输精取得了较好的输精效果，可以在生产中推广应用；使用冻精输精时添加PG可以提高受胎率，经产母羊可以尝试过子宫颈输精或子宫颈深部输精以提高受胎率。
参考文献
[1]侯荩褒,张玉梅,陈玉琦.绵羊精液冷冻保存和人工输精技术的研究[J].当代畜牧,2000,3:31-33.
[2] 罗海玲,贾志海,朱士恩等.稀释液中添加维生素E对绵羊冷冻精液品质的影响[J]. 中国畜牧杂志,2004,40(11):7-9.
[3] 海 龙.提高羊冻精人工授精受胎率的有效措施[J].黑龙江动物繁殖,2004,12(3):34.
[4]鲍志鸿,马惠海,巩俊明等.关于提高羊冷冻精液受胎率的输精方法探讨[J].中国草食动物,2005年专辑:96-97.
[5]周广辅,孙斌,咸德仁.前列腺素在牛羊人工授精中作用的探讨[J].吉林农业科学,1995,2:72-74.
